近年來驢精液低溫冷凍過程中所用到的單層密度梯度離心法、稀釋液配方以及人工授精技術(shù)等對母驢(馬)受胎率的影響，在為驢精液冷凍保存技術(shù)和提高其受胎率的研究提供科學(xué)參考。MVE液氮罐

冷凍精液配種具有高效利用優(yōu)良種公畜，不受時間與地域限制，不受種公畜生命限制等優(yōu)勢。牛的冷凍精液是研究最早且最成功的，而驢的冷凍精液還處在試驗研究階段。據(jù)報道，用種公驢冷凍精液配2匹母馬，受胎1匹;而國內(nèi)最早的相關(guān)研究是在1973年，易理輝等研究發(fā)現(xiàn)，驢冷凍精液配母馬的平均情期受胎率為52.3%，達(dá)到鮮精水平，填補(bǔ)了我國驢精液冷凍的空白。

驢精液的低溫冷凍保存技術(shù)分析

1.鮮精離心方法(單層密度梯度離心法)馬、驢精液不同于牛，其精子密度較低，一般為2×108～3×108個/mL，精液中大部分的物質(zhì)為精清，精清可為精子提供營養(yǎng)物質(zhì)，并促進(jìn)精子成熟;但是體外保存精液時，由于精清中具有促使精子提前獲能的物質(zhì)，會縮短精子體外存活時間。因此，驢精液冷凍保存時需要將精液離心，去除大量精清。目前，一般采用

22℃下離心力400～600g離心10～15min的常規(guī)離心法。近年來，研究者們正在探索更高效的離心方法，如單層密度梯度離心法(SLC)。

單層密度梯度離心法是將樣品加入到惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。研究表明，使用該方法離心公馬精液可以獲得更好的精子活力、質(zhì)膜完整性及 DNA 完整性等，從而提高其受孕能力。受此啟示，2012 年至今，I.Ortiz 等一直致力于驢精液單層密度梯度離心法的研究，并發(fā)現(xiàn)在進(jìn)行離心處理前向精液中加入Equipure TM或Androcoll-E-Large，尤其是后者，可以大大改善驢冷凍精液的運(yùn)動參數(shù)、生存能力及細(xì)胞形態(tài)等，下一步將探索該方法是否可以提高母驢受胎率。

2.稀釋液配方

稀釋液一般包括基礎(chǔ)稀釋液和冷凍稀釋液，其配方須滿足以下條件：

(1)、對精子無毒害作用;

(2)、能供給精子營養(yǎng);

(3)、酸堿環(huán)境適合精子生存;

(4)、滲透壓適當(dāng);

(5)、原料價格合適、配制方便。配方成分一般含有葡萄糖、卵黃、甘油、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸、青霉素、鏈霉素等。按功能可分為營養(yǎng)供給劑、低溫保護(hù)劑、冷凍保護(hù)劑、pH值緩沖劑、抗生素等。MVE液氮罐